2020-09-16 04:22:22

启动子区域序列要怎么p出来?

我的实验需要证明目的转录因子与目的靶基因启动子区域有结合调控作用,所以打算做荧光素酶报告基因实验。公司建议我买空载体,然后自己p那个启动子区域出来加载到载体上面。请问有人做过这个报告基因的实验吗?这个启动子区域序列要怎么p出来?


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细胞生物学×

4个回答

比如使用HEK293FT细胞基因组DNA PCR出你需要的目标基因启动子序列,克隆到不带启动子的Luc或GFP的载体上就好了!


2020-09-16 04:23:25

我最近做的工具细胞实验,和你的类似,一般启动子都是在基因第一个编码子上游2100bp之间,最简单的办法就是你去Pubmed 里的Gene上找到该基因,然后把这2100bp都copy出来。放到prime 5中去,直接就得到引物了,不过你还需要在两端加酶切位点,这样你才能将p出来的promoter和你的载体连接起来。这是一个笨方法,时间要花挺久的,而且从你问的问题可以看出,对分子实验并不是很擅长,不建议这么做。我们实验室资金比较充足,我是直接找了公司,他们公司有现成的载体而且能够精确的预测基因的promoter序列,直接就能合成出来。


2020-09-16 04:24:46

gene browser上直接搜索基因,然后blat,获取序列(选择TSS前面序列,根据实验需求)

2020-09-16 07:03:59

有类似的启动子预测网站,针对原核,真核,植物等

2020-09-17 06:03:29

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