总黄酮的测定我认为不能一概而论的都与芦丁挂钩。不可否认绝大部分植物提取物中的黄酮类成分中芦丁的含量相对较多，但我们都以芦丁作为我们的测试对象可能会造成总黄酮含量结果偏差。我提议，在决定测试方法前先作调查研究，确定要测定的黄酮主要有那几个，它们的紫外吸收图形是否接近，然后综合考虑决定用什么波长，用那个对照品较为合适。至于方法的建立，那时常规的做法。虽说是常规，做分析的最头痛的莫过于前处理方法的建立，前处理方法建立好了将是一半路程走完了，胜利在望。黄酮的前处理富集方法很多，除了聚酰胺外还可以用DEAE LH20、C-18反相硅胶以及大孔树脂等。必须进过方法研究后才能决定。紫外分光光度计测定的精度不是很高，用HPLC测定则对照品的数量则是一个难点。仅供参考。

你是不是用的NaNO2、Alcl3、NaOH方法显色？如果是，应该在500nm以下有最大吸收，以前我做的是490nm。如果加入没有吸收，你可以先考虑一下浓度，加大浓度看有没有出现红色或者粉红色。加大浓度没有反应，请继续往下看。仍没有的话，建议看看你用的试剂是不是有问题，是不是货真价实。你可以用标准品来实验，比如芦丁，若没反应问题就找到了；如果芦丁反应正常，说明另有蹊跷，再向下看。3.另外是你的总黄酮在固体中含量高不高？如果总黄酮含量不高，只是粗提物，其他成分会影响，未必会在500nm左右出现最大吸收。因为测黄酮的反应比较粗糙，它可以和具有邻二羟基、a-羟基醛酮等化合物反应，并不专一和黄酮作用。那么就是其它成分的干扰了，建议进一步纯化后检测。

很多文献中报道确实用芦丁作为总黄酮的含量测定的标准品。但我要说的是，黄酮类药物很多，结构也相差很多，不一定和芦丁的基本结构一致，如查耳酮，二氢黄酮，异黄酮，黄酮醇，花色素，橙酮类等。芦丁为黄酮醇甙，如果你的黄酮结构和芦丁有差异，则可能在显色上有区别。结构中具有邻二酚羟基兼有3-羟基、4-酮基或5-羟基，4-酮基的化合物才能和金属离子络合产生颜色。并且不同化合物产生的颜色也有差别，因此，芦丁会显红色，你的黄酮则不一定会显红色，并且波长不一定在500nm。