如果我设计的话，１做完后，直接到４，然后如果４出来了，再回头到３
只是顺序问题，论文中还是要包含３中提到的３条通路的变化数据，哪怕是阴性或假阳性。如果出现假阳性，反而更有价值，因为还可以继续深入，为什么你的某一刺激因素会出现有别与其他刺激的这种假阳性结果。如果能证明啥出来，那么这个论文的价值会进一步提升。

 浅谈一下个人的观点：思路大体是正确的，步骤3很重要，4可以没有，但不能没有3！4存在一个严重的错误，记住：研究信号通路，抑制剂/阻断剂一般应该预选加入（预处理），即加在刺激因素之前。

我觉得楼主的意思是：１，先看刺激下几条已知通路的marker呢？
２，在看上面已知marker之前先用阻断剂阻断后看phenotype的变化再说。而不是在具体实验protocol里面什么时候加。仅仅是个人的理解。

楼主的４就是这个意思吧？但是这样做还有一个对照要设，就是要做basal的比较。