2019-06-11 12:28:27

RNA水平和蛋白水平做出的结果不一致说明什么问题

我们可能经常会碰到在RNA水平(如PCR)和蛋白水平(如WESTERN)做出的结果不一致,如果这种情况单从理论分析(先抛开实验操作等因素)是什么原因造成的,说明了什么现象。
参加过很多场答辩及专家成果鉴定,往往有些专家会提出这类问题,而答辩者大部分回答不上来。请大家谈谈,第一先从理论层面分析,第二再结合实验操作来谈。谢谢

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6个回答

一点浅浅的见解,不一定对:

1、从试验技术角度看:mRNA丰度很高,应当翻译出相应丰度的蛋白,若蛋白水平低,可能跟WESTERN选用的抗体有关。具体说,该蛋白有没有经过修饰、折叠、磷酸化、脱磷酸化等等都影响其抗原性,针对同一个蛋白的不同抗原形式,就可能做出不同的抗体,而在使用其中某一种抗体检出蛋白时,很可能不具有代表性,例如:CREB的抗体就可能检不出CREB-P,导致检出结果偏低。特别是某些具有活性的酶蛋白。

2、从理论上看:如果是mRNA丰度低于相应蛋白,那么赞成楼上说法,蛋白的降解减少了,储存增加了。

2019-06-11 14:28:05

turn over level应该是翻译后水平。其实这些问题看你怎么解释,只要结果重复性好,结果可信就行。最简单的一种解释,是PCR是2的n次方变化,而wetern不是,再者两种方法的敏感性不一样,一个是拷贝数的差异,一个是微克数的变化。但如果一种增加,另外一种则降低。这往往与RNA或蛋白在细胞内的稳定性相关。如果某种RNA稳性性差,易降解,则易出现RNA降低,而蛋白表达增加;如果某种蛋白质稳定性也差,则易出现蛋白表达降低,而RNA增加。对付专家的解释尽可能地提供几种可能性。当然,RNA和蛋白的修饰更易解释了,他们对这方面的了解通常并不多。

2019-06-11 14:51:00

mRNA的稳定性是需要考虑的因素,不同刺激虽可引起同样mRNA的表达,但表达出的mRNA的稳定性却不尽相同。即是说,某些情况下,虽然表达mRNA,但很快降解,从而会影响蛋白表达。

2019-06-11 15:29:40

有可能是蛋白翻译延迟?

2019-06-11 15:47:54

这个我个人认为可能有两个原因:如果RNA高而protein低 可能是翻译阶段出问题了,也就是说,虽然有相当数量的RNA但是由于翻译效率低,所以蛋白水平低
如果是RNA低protein高,则可能是蛋白降解有问题了

2019-06-11 16:00:15

如果 miRNA水平高而protein不表达,可能与microRNA的伏调控有关。另外,RNA水平高,蛋白水平低,撇开试验操作因素,理论上说也是有可能的,可能是蛋白表达正常但降解比如泛素化增强了


2019-06-11 17:23:35

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