2021-03-05 05:28:18

想做nf-kb的激活,请问如果我只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测可以么?

想做nf-kb的激活,请问如果我只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测可以么?


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凋亡坏死与自噬×

3个回答

可以,做完WB后用Image软件经行成像分析,可以半定量检测。


2021-03-05 08:10:37

你的这种情况,只用western 做Ikba和p-Ikba的半定量检测是不可以的,或者说是不严谨的。首先,你要知道Nf-kb的激活通常与IkBs(IkBa、IkBβ、IkBε)的降解降解有关,但这并不绝对,也不是其唯一的途径,比如P50、p65的表达调节也可影响Nf-kb,况且IkBs还可细分为三种类型。在不知道自身实验具体机制的前提下,选择其中的可能来做WB,这种情况只能说是在验证,就衡量NF-kb的活化程度而言,无法达到定量的标准和级别。


2021-03-05 08:19:40

最好做EMSA检测NF-kb的活化程度,或者用报告基因的方法也行,这是最直接的。再不行就用western做NF-kb的转位。当然,NF-kb的上游IkB-a,IKKa/b以及下游的iNOS和COX-2也要做。另外还要做NO,PGE-2,IL,TNF以及ROS等炎性因子检测,以及MAPK(ERK,JNK,p38)的表达。这样做就完整了。

2021-03-05 08:25:59

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