input就是最开始提的蛋白

没做免疫共沉淀的总的蛋白，whole cell lysate

1)     吸弃细胞板内培养基，细胞用预冷的PBS洗2次，加适量的IP裂解液（含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂）。冰上裂解10-15min，充分裂解后收集细胞。

2)     4℃，10000rpm，10min。

3)     转移上清至预冷的EP管内，取上清蛋白定量。取500µg蛋白，用预冷的PBS将体积补到500µl。（剩余的蛋白用于Western Blot Input对照）

input是阳性对照的意思。免疫共沉淀实验是对蛋白A进行IP，对蛋白B进行WB。而Input是直接取细胞裂解液，进行蛋白B的WB，证明细胞裂解液中存在WB。

这个实验不是要做蛋白A和蛋白B的相互作用么，那么前提是你提供的细胞裂解液里要有蛋白B和蛋白A啊，如果没有，那这个实验不就没有意义了么？那怎么证明细胞裂解液里是有蛋白A,B的呢？假设蛋白A是已知蛋白，然后利用A的抗体区吊蛋白A，只要能吊出来，就说明细胞裂解液中存在蛋白A。那怎么证明细胞裂解液中有蛋白B呢？我们就直接取细胞裂解液做蛋白B的WB，验证细胞裂解液中确实是有蛋白B的。直接取细胞裂解液做WB，就是阳性对照。