1.需要知道浓度，否则后面无法计算抗体用量。2.input的作用一是知道包含目的蛋白，二是可以看看他们的含量估计。3.一般要求是定量配平的，否则怎么叫对照呢？抗体一般1ul抗体对应1mg蛋白，如果说明书有明确用量则以说明书为准。4.目的蛋白中的一部分，你的理解是正确的。否则就无法判断co-ip的结果是抗体拉下来的多呢，还是结合能力增强导致的结合的多。

1. 保证结果真实性的前提下，尽可能的让图片好看是我们永恒的目标。2 1ug：1ul我也是论坛或者前人推荐的，重点是按照这个比例做出来结果了。如果有抗体说明书的话，当然首先尝试说明书推荐的条件，如果出不来，可以尝试1:1。但是有时候你会发现按照抗体说明书的推荐，几次抗体就用完了。这就很被动了，抗体很贵啊，所以也需要摸索。这些都需要时间，需要静下心来做3. 理论上感觉可以这样理解。但是有人曾经用IP后的input，跑目的条带，好像也能看到条带。你试试。也不麻烦。

裂解液中的目的蛋白即使抗体过饱和也不能全拉下来的，试试做一下IP后的上清，目的蛋白还是有的，但是肯定比IP前的裂解液中的少（因为一部分拉下去了）但是与lgG阴性对照组比，IP后的上清跑出来的目的蛋白肯定少，而lgG组，IP前后几乎没有差别。

抗体的加入量经验值：1ug抗体加入1mg的蛋白裂解液，一定要定量，才能确定IP时加入抗体的量。