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2024-04-25 22:01:29

CE-SDS分析方法验证，大家都是怎么样做的？

抗体仿制药，做放行时，要验证CE-SDS，看到USP里的validation report里测定重复性是用NGHC (non glycosylated heavy chain） spike，准确度也是将NGHC spike到standard solution里测定回收率。nr-CE-SDS用了一个solution是 LC(light chain solution)。

请教，大家在做验证也是这样做的吗？NGHC和LC去哪里获得呢？

药物学

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用切糖酶吧，制备一份样品，每次实验的时候添加百分之2到标准品中。轻链的话你可以把温度开高些，多煮一会儿，轻链碎片就会增加很多。温度高煮很容易制备出聚体，轻链可以还原获得，如果看降解片段，酸碱水解加热可以获得不同片段。实践中我做过两个不同的双链重组蛋白，通过直接加热破坏能获得聚体和单链片段，具体什么机制不懂。

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2024-04-25 22:34:17

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我看Avastin的验证报告里面，非还原CE-SDS方法验证时并没有制备纯的LC，只是样品处理时时间延长，人为制造低分子量杂质。

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2024-04-25 22:39:21

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连续高温水煮的话，可以煮出aggregates, 以及HHL, HH, HL, H, L这些fragments。

知道其中LC比例和量的情况下，再spike到standard solution做method validation，应该没问题。

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2024-04-25 22:56:46

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