多肽分析遇见的问题

在做一个分子量约为3000-4000的多肽，做的中控，方法是流动相A：磷酸盐溶液（称取23.13g 磷酸二氢钾溶于2000ml纯化水中，磷酸调节pH值3.0）-乙腈（80：:2）

流动相B：磷酸盐溶液-乙腈（60:40）梯度洗脱：

图片1.png

流速：0.3ml/min，柱温：40℃。现在遇到一个情况就是在这种色谱条件下，有的时候对照品出峰时间为40min，有时出峰时间为65min左右。请各位帮忙分析一下都有哪些因素可能会造成这个结果呢？

多肽药物

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1.从仪器的方面来讲，有可能是比例阀控制流量不准。

2.色谱柱平衡时间不够，或者色谱柱没有冲洗干净。

3.是同一天还是不同天，流动相放置过久，要考虑到有机相的挥发和盐的沉淀，当然这个原因不会造成出峰时间相差那么大。

4.流动相PH值靠近多肽等电点，分子形式、离子形式出峰时间不同。

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2024-03-24 18:56:31

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我做实验时液出现过这个问题，最后发现是乙腈和水相混合造成的，两者混合时，必须搅拌混合，直接超声会造成乙腈在流动相的上层。

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2024-03-24 19:45:36

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做多肽及蛋白质，一般都是使用，水，乙胫，各含0.1% TFA，也有人用0.05％。那是为了减少有的UV探测器有refractive index effects(安捷伦就有这个毛病）。

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2024-03-24 19:56:02

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pH的问题可能性比较大，也许在等电点附近了，大部分多肽用的是0.05%TFA作为水相，楼主可以试试。

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2024-03-24 20:22:22

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