2020-07-19 07:04:17

有一多肽,里面有制备过程中残留的三氟乙酸,该怎么除掉?

有一多肽,里面有制备过程中残留的三氟乙酸,请问各位行家,我该怎么除掉?现在我们拟采用葡聚糖凝胶柱,用50%乙腈作为流动相,是否可行。我们的这个多肽水溶性不好。

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3个回答

多肽脱去TFA有几种情况,如果TFA和肽链结合力不强,一般采用反相色谱,水洗脱可以直接得到无盐形式多肽,凝胶柱也可行,但操作复杂;如果结合力中等,可用醋酸盐洗脱,得到醋酸盐产物;但如果结合力很强,用醋酸铵洗脱,得到醋酸盐。后面两种用凝胶色谱基本不可行。原理比较简单,弱酸置换强酸。

 


2020-07-19 10:45:06

在反相色谱中,三氟醋酸出峰时间很快,很容易去除的。没用过凝胶柱,至于方法是否可行,你先小量进样,在210nm下看三氟醋酸跟主峰分离度就知道了。

2020-07-19 10:58:05

有两种方法:

1.将肽上柱后,先用0.2%醋酸铵溶液(pH6.5)冲洗,该过程可以将TFA置换成醋酸盐,之后再用醋酸溶液或纯水洗脱,洗脱浓度看你要的目标产物要求。

2.用阴离子交换树脂。具体方法很多地方都可查到。

ps:直接用纯水冲洗或者冻干都绝对不能去除TFA。

2020-07-19 12:19:48

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