3个回答
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如果跑非还原SDS胶的话，igG的分子量应该是150KD，但是你还有两个蛋白呢，它们有多少二硫键呢？而且涉及IP和WB所用抗体的特异性问题，更说不清楚。要去除重链轻链的影响，解决的方法还是有的： 1.用兔的igG做对照 2.用抗Fab和Fc抗体特异性封闭轻链和重链 3.在WB二抗上下工夫，这种二抗针对的是轻重链间的二硫键，所以如果跑SDS胶，最后显影是检测不到轻链和重链的 |
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你做WB的时候，对照设得好一点，争取出一个比较权威的结果。例如你可以在的IP后的样品里一个加入一抗和二抗，另一个只加入二抗，两者差异的条带，即为你的目的条带。 |
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你的这个问题困扰了不少人，轻重链对目的蛋白的影响，如果你用Protein A 或G来做沉淀用的二抗，WB还会有Protein A或 G造成的杂带的影响。楼上的建议的几种方法理论上可行，但是实际操作起来难度和消耗都较大，第一，你需要购买几种特殊的抗体来做封闭用，封闭的效果，很难预测。第二，WB用特异的二抗，这个市场上不一定有卖，即使有也一定价格不菲。第三，假如这些条件你都具备了，你要对这个实验进行很好的条件优化，要想得到一个好的结果，我认为没有十次、八次的WB是作不出来的。以前我也遇到你这个同样的问题，后来是买个试剂盒搞定的。 |