资讯 问答 药数据 药工艺 论文
发布
提问 传论文
up vote 288 down vote
2024-04-13 22:10:01

如何在分离纯化中保护蛋白质的游离巯基？

我的蛋白上有一个Cys，本来这个蛋白很好纯化的，但很不幸的是纯化获得的蛋白跑非还原电泳竟有两条带，二聚体带占了很大部分。我的这个游离巯基还是很重要的，怎样才能在纯化的过程中避免两个分子间的巯基形成二硫键的呢？ 谢谢！我已经试过加巯基乙醇，效果有限，而且我的蛋白理论上不应该加巯基乙醇或是DTT的。望有经验的兄弟指点迷津。


蛋白质技术
回答 0 评论
更多
您已邀请来回答问题
更多>>
蛋白质技术×

5个回答

up vote 11 down vote

游离的Cys成双键的控制方法一般是选择还原性的条件，如果不宜加还原试剂的话可以采用以下方法加以控制：

  1. 1.流动向脱气后使用，以免流动相内的氧气氧化；

  2. 2.降低纯化过程的温度，减慢成双键的反应速度；

  3. 3.调节流动相的pH值，让成键反应的化学平衡向打开双键的方向移动。


0 评论 收藏 举报
2024-04-13 22:14:04
up vote 7 down vote

添加游离的cysteine 3mM


0 评论 收藏 举报
2024-04-13 22:19:48
up vote 15 down vote

-SH常用的保护剂有苄基和对甲氧苄基，苄基可以用Na-液NH3去除，对甲氧苄基在液态氟化氢中于0度处理30分钟去除，碘乙酰胺和碘乙酸也能保护，但这些保护剂的去除可能很麻烦！


0 评论 收藏 举报
2024-04-13 23:28:45
up vote 14 down vote

加DTT后再次过柱。我这么做过，成功了。


0 评论 收藏 举报
2024-04-13 23:30:32
up vote 7 down vote

加游离的半胱氨酸

0 评论 收藏 举报
2024-04-14 06:40:37

你的回答

提问时间： 2024-04-13
浏览量： 3951
最近回答： 2024-04-14

相关问题