已经重复试验了很多次了,提蛋白加了蛋白酶和磷酸酶抑制剂了,马上煮好蛋白,-20度冷冻,第二天跑胶,8%SDS-PAGE,转膜200mA 90min,BSA封闭1h,CST公司的一抗1:1000稀释冷藏孵育过夜,二抗孵育2h,本来预计140kD有条带,但实际上非常浅(几乎看不出来),200多kD的地方和105kD左右的地方却有比较清晰的条带,这是为什么?