2024-04-27 14:05:34

血提取总RNA用红细胞裂解液还是淋巴细胞分离液?

想提取血液中的总RNA,打算离心保留血浆后用剩下的血细胞操作,一番搜索发现提RNA有用红细胞裂解液的有用淋巴细胞分离液的,不知道大家常用的是哪种?优势在哪儿?自己拟的两个版本操作和利弊分析如下:
(一)红细胞裂解法
1、取2mL离心后血细胞液,加1mL PBS稀释(补齐血浆量),加入3倍体积的预冷红细胞裂解液9ml,混匀后室温静置10min,10000rpm离心1min,彻底吸弃上清。
2、加入1ml PBS重悬白细胞沉淀,转移至1.5m EP管,7000rpm离心5min,吸尽上清。
(二)淋巴细胞分离法
1、取2mL离心后血细胞液,加1mL PBS稀释(补齐血浆量),缓慢倒入3ml淋巴细胞分离液中,24℃ 2500rpm离心30min,升5降5。
2、小心吸取中间淋巴细胞层,转入装有3ml PBS的离心管中,1800rpm离心10min,弃去大部分上清,余下液体吹打沉淀转移至1.5m  EP管,加入1ml PBS,7000rpm离心5min,吸尽上清。
后续均采用经典Trizol法进行操作。
红细胞裂解法  优点:操作简便;缺点:试剂用量较大。
淋巴细胞分离法  优点:试剂用量较小,细胞损伤小或许激活的内源性rna酶更少;缺点:操作较繁琐。


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1个回答

先提取淋巴细胞比较好,这样1RNA纯度高我一起拿试过,2排出了幼年红细胞RNA影响

2024-04-27 14:07:20

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