2017-12-25 13:33:29

柱前衍生和柱后衍生的区别在哪?

最近在做多糖的单糖组分分析,多糖样品会经过一个PMP柱前衍生的步骤,请问这一步骤的原理是什么呢,柱前衍生和柱后衍生的区别在哪里?


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HPLC分析中,样品需要衍生化处理的目的在于将不适用于液相色谱分析的物质转变为易于分析的衍生物,通过改善化合物的物理化学性能从而改变其选择性,提高待分析物的检测灵敏度,最常用的方法是给不能被检测物质的结构中加入发色团,使其能够被检测。柱前衍生是目前应用最为广泛的衍生技术。

柱前衍生是指待测物在液相色谱分离前就完成衍生化,再根据衍生物的性质进行色谱分离检测,若衍生过程所用的试剂若能稳定存在,且衍生反应条件成熟可靠时,其优势体现在对设备要求不高,可以人工衍生,且衍生后的副产物可以经过预处理步骤除去,相应的,手工衍生化过程会受到人为因素的影响。

柱后衍生是指待测物先经过色谱分离后,然后进入反应器中与衍生化试剂反应,最后进入检测器的衍生化方法。该方法可以实现分析的自动化,反应重现性好,不影响被测物的色谱行为,但不利点在于需要配备额外的反应装置和反应设备,过长的设备管线会使从色谱柱中出来的样品在管路中造成峰扩展,导致分离度降低。


2017-12-25 13:46:22

糖的衍生一般是加PMP在碱性溶液中70℃30min完成,衍生结束后还要把剩余PMP用有机溶剂(如氯仿等)萃取出来后进行HPLC分析。


2017-12-25 13:47:55

一般柱前衍生不要特别装置,可以人工进行样品的衍生化;柱后衍生需要特别装置。

2017-12-25 14:00:03

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