提取蛋白时没有加loading buffer直接煮沸，蛋白还能不能用?

做Western blot时，提取蛋白时没有加loading buffer直接煮沸，蛋白还能不能用？

生物化学药理学

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不能，loading buffer里有DTT和SDS，DTT打开蛋白间的二硫键，使蛋白呈线性，抗原表位彻底暴露，SDS使蛋白带上过量的负电荷，使其在SDS-PAGE中电泳与其所带电荷无关，仅与其分子量有关。

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2024-04-23 12:40:51

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不能啦，这样的话蛋白已经坏掉了。一定要加loading buffer，要不然光是蛋白遇热会降解的。我也试过没有加loading buffer直接煮呐，结果成絮状物，浪费样品了啊。

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2024-04-23 12:42:45

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最终的目的是想让蛋白在结合sds之后是保持是变性的。所以即使蛋白先是变性沉淀的，你加上sds之后，继续煮沸，应该也是可以把它煮融的，跑胶应该是没问题的。

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2024-04-29 14:10:19

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