2020-07-12 19:28:08

从薄层色谱到硅胶柱层析怎么应用啊?

想通过过柱子找到有活性的成分。先用薄层色谱选择展开剂,在(1)石油醚:丙酮;(2)石油醚:乙酸乙酯;(3)石油醚:甲醇;(4)二氯甲烷:丙酮;(5)二氯甲烷:乙酸乙酯;(6)二氯甲烷:甲醇共六组展开剂中选择了二氯甲烷:丙酮。然后通过浓度梯度的检测,得到34:1时目标物的分离效果最好。可是应该怎么把这个应用到硅胶柱层析当中呢?还有在收集的时候应该以什么样的体积去收集呢?有什么方法吗?


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3个回答

可以直接采用二氯甲烷:丙酮=34:1的混合溶剂做为洗脱液,硅胶柱最好利用洗脱液湿法装填,并经过有效沉降(至少过夜)。上样量与硅胶用量比例依据物料分离的难易程度确定,一般情况下采用10-50倍的硅胶用量均可;至于收集时的接收器更换频率也要依据上样量及薄层筛选时杂质点的分布情况而定。总之,柱层析分离属于一个经验学科,需要依靠实验寻找最佳的洗脱液、硅胶用量、硅胶柱的层高比、收集的频率等等。


2020-07-12 19:35:19

展开与洗脱是色谱分离的关键操作。洗脱液一般可以采用定体积收集的方式。一般实验室用到的柱子内径5-30mm,柱长10-50cm,洗脱液的流速可以控制大约1-3滴/秒,接收器的更换频率一般可以控制在5-20ml,依据杂质分布情况而定,如果杂质点较为密集,则接收器的更换频率应快些,反之则慢些;收集到得到洗脱液可以依据薄层检测(也可以采用其他检测手段)进行合并处理。以上均是指实验室规模的小柱子,未来放大可以依据实验室积累的数据及经验,进行相应的放大,当然上样量、接收器的更换频率均会进行相应的调整,当然放大过程中更多的是基于经验。


2020-07-12 19:50:27

如果样品不太复杂可以将目标化合物Rf值跑到0.25左右,用比此时展开剂极性稍小些的洗脱剂装柱,大约在洗脱到第四五个柱体积时出纯品。


2020-07-12 19:54:36

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