刚开始做生物材料生物相容性方面的研究。有个问题想咨询一下大家。谢谢！

我准备做细胞增殖实验，把细胞接种至生物材料上，用cck-8试剂盒检测其OD值判断材料对细胞增殖的影响。我的问题是：

1.细胞接种密度的问题。我养的是大鼠的BMSC，拟用48孔板培养，文献报道大多为96孔板或2孔板，48孔板不太多，所以想请教一下大家细胞接种密度多少合适？

2.CCK-8试剂盒说明说每孔加10ul CCK-8液，但这是针对96孔板而言，48孔板的话是不是需要翻倍，加20ul？

3.文献中报道的方法都是说先加一部分含细胞悬液的培养基，孵育一段时间再加培养基。为什么要这样做，为什么不可以一次加至目标量？为什么要分两次加？

4.我们实验室的酶标仪比较老，没有设置48孔板的检测，所以只能用处理后，把上清吸至另一96孔板检测，这样会对结果有影响吗？

5.关于对照和空白组设置，我觉得应该以单纯细胞悬液无材料作为对照组，但实验室有师兄说应该把材料+不含细胞的培养基作为对照组，很困惑。