之前设计的引物，P出了结果，但是产物很少而引物二聚体很多

DNA序列5‘端GC含量太高，之前设计的引物，P出了结果，但是产物很少而引物二聚体很多，考虑是引物上面的问题，所以问下这种情况如何重新设计引物，或者还有别的方法么？大家来讨论讨论…………

PCR技术

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我觉得引物调整空间太小的话，你就着重退火温度吧。然后二聚体就胶回收就算了，不纠结。

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2024-04-03 21:13:00

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两种方法可以去试试：1. 在DNA 的5' 端继续往前找，也就是在ATG的5‘端往前应该还有一段mRNA序列里面找合适的序列。 2 用已经P出来的少量产物做模板继续PCR，最好先能鉴定P出来的缺失是你想要的目的片段。

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2024-04-03 22:36:34

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先将包括你的目标片段在内的一个大片段P出来，然后以此为模板再P你的目标基因。如果你必须固定头尾的话，那就先将引物适当调整碱基，就是在5‘端加上AT等，先P出来你的目的点，然后再以此为模板，用标准引物P你的目标片段。总之，PCR策略非常灵活

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2024-04-03 22:37:29

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