细胞转染后用药物筛选一下,可以长出来克隆,不知大家怎么挑取的? 我用过滤纸法,可能是不得法,细胞不往滤纸上粘,还在皿里。
最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选,这样很简单就得到单克隆了。虽然用的板子多,但得到的单克隆是相对比较高,也非常容易消化获得单克隆的细胞,我们经常用这个方法的。
可以在大皿上筛选,使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞。筛克隆不难,但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。
我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的。
个人建议用96孔板,虽然看细胞、给细胞换液什么的非常麻烦,但是对于筛克隆还是比用大皿容易些,细胞没那么容易老化死掉,特别是对于转染效率低的实验相对有效些。用枪头自作克隆环我也尝试过,但是环固定不了,加液的时候容易移动。另外一个问题是加的胰酶基本都集中在环和皿底接触的位置,中间的细胞消化不到,如果要使中间的细胞消化下来,胰酶用量就必须比较大。 个人实验过程中的一些心得体会,体细胞转基因的稳定筛选确实是很头疼的问题,不知大家有什么更好的方法没有?