2024-04-28 19:05:32

鱼血细胞的染色效果不好,需要更换什么染液?

我很费尽的采到了血,可是血涂片做的不怎么样。我采用了一般的血细胞的染色方法三种:Giemsa染色,Wright染色及其二者复染,还有三色染色效果都不好,都不能通过颜色来判断细胞的类型。
大家说说自己做过的方法,或者碰到的问题,看到过的方法也行

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3个回答

鱼类血液细胞计数
鱼的血液循环是封闭的,其心脏比较简单,位于鳃附近,由一个心房和一个心室组成。血液循环为单循环,鱼的鳃由许多有许多毛细血管的小叶。通过它巨大的面积它将水中溶解的氧吸收到血液中。鱼鳃的功率非常高(有些鱼可以利用70%的水溶解的氧),鱼的红血球的功率很高,能准确的计算出红细胞的变化对鱼病的诊断和生理变化提供非常重要的帮助。
鱼类的血液量较少,一般为体重的1.5-3%。

红细胞:多数鱼类的成体红细胞呈扁卵圆形,具细胞核,细胞质内具有含铁的血红蛋白,所以血液为鲜红色,载氧气。一般软骨鱼类的红细胞大于硬骨鱼类,但数量上硬骨鱼类约为软骨鱼类的10倍(硬骨鱼类300万/mm3,软骨鱼30.3万/mm3);白细胞的数量远较红细胞为少,如鲤鱼白血球的数量约为红细胞数量的1/20.有吞噬作用、免疫作用。
血小板:无色、约为红细胞核的大小,鱼类血小板有两类型,一种核为梨型,长棒型或圆型,另一种像小的淋巴细胞,两者很难区别,这种血小板常聚集成“岛”。周围有少量细胞质,数量少于红细胞但多于白细胞,与血液凝固有关。
白细胞:主要是揭示鱼病的严重性或检测治疗结果,如可通过白细胞增高的程度判断感染的严重程度。又分淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜酸性粒细胞
鱼的嗜碱性粒细胞容易溶解,因而在外周血中很少看到,有的人说没有,一般的类型都好分辨。
常见判断:
1.  鱼类血液红细胞减少说明水中氨(又称亚摩尼亚)和亚硝酸盐浓度会升高
2.  血红蛋白量也减少说明鱼类感染严重进食少,红细胞比容反映了血液输氧能力的下降,说明饥饿导致鱼体需氧量减少,进而使代谢水平降低。
3.  白细胞增高说明鱼类受到感染,也可以根据白细胞的变化判断用药治疗的效果,急性细菌性感染时白细胞的增高更为明显。
4.  嗜酸性粒细胞增多常见寄生虫虫感染,嗜酸性粒细胞减少说明观察传染病的预后不良
5.  妊娠周期常见嗜碱性粒细胞升高
因为鱼类,一般是由由一个心房和一个心室组成。血液循环为单循环所以血细胞计数不用参照人的血液分析仪仪来做,
一般鱼类的红细胞是有核的,必须用动物专用的试剂才能准确的对细胞进行计数。    

2024-04-28 19:17:07

Wright染色加Giemsa染色效果应该不错,可能是你的PH值不对,也可能是染料配制的时间太短,没熟化,我用的都熟化2-3年了的染料,要不先用wright染色,再用低浓度的亮兰染色十几秒,效果也不错。

2024-04-28 19:18:24

我个人的经验是,关键还是染色的时间掌握和缓冲液的pH值, 如果楼主pH值是6.4我觉得太低了,我做时用的6.8。
另外,在加染色液后,加BUFFER时一定不要使染液太干,否则怎么也冲洗不好;冲洗时轻轻晃动玻片,使沉淀的染料或者杂质能浮起来,这样才能冲洗掉。

2024-04-28 19:25:07

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